RealPAGE®類(lèi)梯度PAGE凝膠快速電泳試劑盒
RealPAGE® Gradient-like
PAGE Gel Rapid Electrophoresis Kit
|
貨 號(hào)
|
名 稱
|
可制膠數(shù)量
|
|
RTD6165
|
RealPAGE®類(lèi)梯度PAGE凝膠快速電泳試劑盒
|
60塊 0.75 mm膠
＞45塊1.0 mm膠
＞30塊1.5 mm膠
|
● 貨品內(nèi)容：
|
組份
|
名稱
|
規(guī)格
|
|
1
|
上層膠溶液（2×）
|
40 ml
|
|
2
|
紅色上層膠緩沖液（2×）
|
40 ml
|
|
3
|
下層膠溶液（2×）
|
125 ml
|
|
4
|
下層膠緩沖液（2×）
|
125 ml
|
|
5
|
改良型促凝劑
|
10 ml
|
|
6
|
刻度配膠杯
|
6個(gè)
|
|
6
|
快速電泳緩沖液（20×）
|
2×500
ml
|
|
7
|
說(shuō)明書(shū)
|
一份
|
● 運(yùn)輸、貯存及效期：
本產(chǎn)品常溫運(yùn)輸；4-8℃貯存，其中配制后的改良型促凝劑貯存于-20℃；有效期一年。
● 產(chǎn)品特點(diǎn)：
分離范圍廣：所配制凝膠具有類(lèi)似梯度膠分離能力，無(wú)需區(qū)分不同濃度下層膠；
電泳速度快：200-250 V 恒壓，25-35 min 即可完成電泳；
快速制備凝膠：無(wú)需液封等待下層膠凝固，即可直接灌注上層膠，制膠更省時(shí)；
紅色上層膠：可制備帶顏色的上層膠，為點(diǎn)樣和區(qū)分不同凝膠提供便利；
避免異味：無(wú)需使用 TEMED，環(huán)境安全友好；
● 產(chǎn)品簡(jiǎn)介：
該產(chǎn)品利用聚丙烯酰胺凝膠電泳原理，采用獨(dú)特配方，所配制的凝膠具有類(lèi)似梯度膠分離能力（10~250 kDa），低、中、高分子量蛋白可均勻分布，無(wú)需區(qū)分不同濃度下層膠；試劑盒采用上層膠和下層膠的預(yù)混配方，只需加入改良型促凝劑即可凝膠，灌入下層膠后，無(wú)需等待凝膠，直接灌入上層膠即可，簡(jiǎn)便快捷；所配的上層膠為紅色，點(diǎn)樣孔清晰易辨，方便點(diǎn)樣。
本產(chǎn)品專門(mén)用于 SDS-PAGE電泳（不適用于非變性電泳），包含全套 PAGE 凝膠制備試劑和配套電泳緩沖液，并且在 200-250 V 恒壓條件下，25-35 min 即可完成電泳。
本產(chǎn)品配套提供改良型促凝劑 ，其具有更好的穩(wěn)定性和催化效能，配膠過(guò)程中無(wú)需額外添加TEMED。
本試劑盒大約可以配制30-60塊常規(guī)大?。?×10 cm）的PAGE凝膠，具體數(shù)量根據(jù)凝膠厚度決定：0.75 mm厚度凝膠可以配制60塊膠，1.0 mm厚度凝膠可以配制至少45塊膠，1.5 mm厚度凝膠可以配制至少30塊膠。
● 使用說(shuō)明：
一. 制膠前的準(zhǔn)備：
1.1 即用型改良型促凝劑配制：
試劑盒提供的改良型促凝劑為干粉，第一次使用前加入10 ml超純水，徹底溶解后使用。配制好的即用型改良型促凝劑置于4℃?zhèn)溆茫L(zhǎng)期不用建議-20℃貯存。
1.2
推薦操作：
實(shí)驗(yàn)前半小時(shí)，取出試劑盒所有組份，常溫靜置半小時(shí)使溶液恢復(fù)到常溫后輕柔混勻后使用，可以有效降低制膠時(shí)產(chǎn)生氣泡的可能性。
二. 凝膠配制(以一塊0.75/1.0/1.5 mm厚度的8×10cm膠為例)：
2.1取等體積紅色上層膠緩沖液和上層膠溶液，各0.5/0.75/1.0 ml，混勻；
注：由于染料的特殊理化性質(zhì)，紅色上層膠緩沖液使用前請(qǐng)搖勻。
2.2取等體積下層膠緩沖液和下層膠溶液，各2.0/2.5/4.0 ml，混勻；
2.3
向步驟2.1的上層膠混合溶液中加入10/15/20
μl改良型促凝劑，輕輕混勻。
注：加入改良型促凝劑后，需輕柔混勻，防止過(guò)多氧氣混入膠溶液，抑制凝膠聚合和導(dǎo)致凝膠內(nèi)可能產(chǎn)生氣泡。
2.4
向步驟2.2的下層膠混合溶液中加入40/50/80
μl改良型促凝劑，輕輕混勻；將溶液注入制膠玻璃板中，使液面和短玻璃板上沿之間的距離為約1.5
cm或距離梳齒下沿距離為約0.5
cm即可；
注：此溶液為過(guò)量，請(qǐng)勿全部注入，可留少許于制膠杯中，便于判斷凝膠狀態(tài)；加入改良型促凝劑后，需輕柔混勻，防止過(guò)多氧氣混入膠溶液，抑制凝膠聚合和導(dǎo)致凝膠內(nèi)可能產(chǎn)生氣泡。
2.5 無(wú)需等待下層膠凝固，迅速將步驟2.3的上層膠混合溶液左右平移緩慢輕柔注入制膠玻璃板中，插入梳齒。
注：加入下層膠混合液后，請(qǐng)?jiān)?/b>1-2分鐘內(nèi)灌注上層膠混合溶液，加入時(shí)一定要輕緩，避免將上層膠溶液沖入下層膠；凝固后上下層膠分界線平整度略弱于使用封閉方法配制的凝膠，但對(duì)后續(xù)電泳沒(méi)有影響。
2.6 待膠凝固后拔去梳齒，用注射器或槍頭吸取電泳緩沖液將加樣孔沖洗干凈，即可進(jìn)行常規(guī)電泳操作。
注：凝膠的聚合時(shí)間與環(huán)境溫度有關(guān)。夏天溫度較高時(shí)，聚合較快；冬天氣溫低時(shí)，聚合時(shí)間會(huì)延長(zhǎng)。
溫度與凝膠時(shí)間參考表
|
環(huán)境溫度
|
18℃
|
25℃
|
37℃
|
|
凝固時(shí)間
|
~20 min
|
~15 min
|
~10 min
|
附：凝膠配方表
|
表一 紅色上層膠配方
|
表二 下層膠配方
|
|
膠厚度
|
紅色上層膠緩沖液
|
上層膠溶液
|
促凝劑
|
膠厚度
|
下層膠緩沖液
|
下層膠溶液
|
促凝劑
|
|
0.75 mm
|
0.5 ml
|
0.5 ml
|
10 μl
|
0.75 mm
|
2.0 ml
|
2.0 ml
|
40 μl
|
|
1.0 mm
|
0.75 ml
|
0.75 ml
|
15 μl
|
1.0 mm
|
2.5 ml
|
2.5 ml
|
50 μl
|
|
1.5 mm
|
1.0 ml
|
1.0 ml
|
20 μl
|
1.5 mm
|
4.0 ml
|
4.0 ml
|
80 μl
|
三. 電泳：
3.1 1×即用型快速電泳緩沖液配制：
|
|
500 ml配制量
|
|
快速電泳緩沖液（20×）
|
25 ml
|
|
超純水
|
定容至500 ml
|
3.1.2
|
電泳緩沖液
|
1×即用型快速電泳緩沖液
|
|
上樣緩沖液
|
5×蛋白上樣緩沖液（變性，還原）
|
|
電泳條件
|
恒壓 200 V ~35 min
恒壓 250 V ~25 min
|
注：本產(chǎn)品所配制凝膠需搭配快速電泳緩沖液使用，才能得到類(lèi)梯度分離蛋白的效果；如果使用經(jīng)典的Laemmli電泳緩沖液（Tris-甘氨酸-SDS電泳緩沖液），分離效果類(lèi)似于8% 凝膠。
四. 凝膠染色或轉(zhuǎn)膜：
4.1 凝膠染色可以選擇FastBlue蛋白快速染色液(貨號(hào)：RTD6202)， 可以在30分鐘內(nèi)完成染色和脫色，也可以選擇常規(guī)法考馬斯亮藍(lán)蛋白染色液（貨號(hào)：RTD6203）。
4.2 轉(zhuǎn)膜緩沖液可以使用濕轉(zhuǎn)法或半干轉(zhuǎn)方法轉(zhuǎn)膜。濕轉(zhuǎn)法可以使用經(jīng)典Tris-甘氨酸轉(zhuǎn)膜緩沖液（貨號(hào)：TB1040）或者使用10×RealBlot快速轉(zhuǎn)膜液（貨號(hào)：RT5020）。半干轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)膜可以使用5×RealBlot快速半干轉(zhuǎn)轉(zhuǎn)膜緩沖液（貨號(hào)：RT5030）。